Nat Neurosci:对小鼠,非人类灵长类动物和人类中功能不同的中间神经元顺利进行病毒操作

2021-10-13 17:36:58 来源:
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大规模的酪氨酸组研究成果将要随之揭示在特定细胞膜子类当中何时何地传达与神经意识癌症系统性的遗传。解读和治疗这些癌症的法则将需要特异性和驱使特定神经纤维亚型的法则。因此,在非全人类灵长类动物和全人类当中保持联系这些年轻人已似乎至关重要。重组绒毛系统性HIV(rAAVs)是在神经当中顺利完成遗传传递的首选法则,对特定的神经纤维族裔不能内在的针对性。系统的强化子发现仍未通过允许以单细胞膜分辨率顺利完成酪氨酸组和表观遗传学研究成果的应用的最新发展而得到加速。但对于强化子选择的查找空间仍然很大。为了集当中我们的强化子选择,作者选择专门研究成果Scn1a的基因表达态势,Scn1a是在不同神经纤维族裔当中传达的遗传,其破坏与不堪重负的人脑瘤病系统性。结合用作走法走法肝细胞膜DNA(scATAC-seq)数据库的单细胞膜测定与跨群落的序列开明性相结合,作者在该遗传一处提名了十个候选基因表达序列。作者确定了三种强化子,共同特异性传达Scn1a的神经纤维族裔的广度。其当中,一种特定的短基因表达序列能够将HIV传达受到限制为传达PV的神经节当中间神经纤维(PV cIN)。

法则:四名受试者(两名男性/两名女性,岁数22-57岁)接受了一项外科手术后,切除了人脑干组织(额叶和鲸鱼体)以治疗耐药人脑瘤。在所有的病症当中,每个参与者都曾接受过一次初步的手术后,摆放硬膜下和/或深度电极顺利完成颅内风险评估,以确定人脑瘤发作的位置。从鲸鱼和额叶取300μm切口,在鲸鱼切口当中,HIV的特异性是基底膜十五大。在接种HIV后7~14d对培养的人切口顺利完成电生理记录下来。将培养的人切口转到到记录下来室。对固有膜和电弧特性顺利完成分析。大鼠分别保持在17.8–26.1℃和30–70%的宏观生态温度和湿度范围内。这些参数被亲密风险评估和控制在豚鼠居住于室。从麻省理工学院(MIT)的族裔当中获得了一只雌性都是狨猴(6岁左右)。成年(2岁)雄性猕猴(macacamulatta)来自内华达州大学戴维斯分校的内华达州国家灵长类动物研究成果当中心。在小鼠人脑切口器(Zivic Instruments)上顺利完成锥体切口,并在冰冷的人工人脑脊髓盐酸(ACSF)当中解剖V1神经节。经过处理后,运用于运用于Nova-Seq S2 100循环试剂盒(Illumina)顺利完成DNA。

结果:在正常或病理发展前提(之外Dravet肉瘤)体检回路未成熟的后期动态的主要持续性是,在不运用于转遗传动物的前提无法进入特定的细胞膜子类。即使采用复杂的遗传思路,年轻的PV cIN也根本无法成为靶标。考虑到它们的丰度(它们都有所有色氨酸cIN的40%)并且出现得相比之下较晚。更广泛地说,在本研究成果当中确定的强化子提供了较强特殊临床意义的神经纤维族裔的访问途径。最明显的是,这些强化剂可以通过遗传疗法或抑制神经纤维活性而潜在地用作减轻Dravet肉瘤的崩溃症状。作者证明了局部和手脚麻醉可用作理论上的HIV传递到人脑干。通过局部麻醉,可能会改善局灶性人脑瘤,PFC功能持续性或鲸鱼记忆持续性。相比之下,结构性引入HIV可用作需要全盘打压的前提,例如,纠正普遍性人脑瘤发作或意识病和神经退行性癌症。作者的研究成果表明,对基因表达元素的严格鉴定为治疗生态当中特定细胞膜子类的给予提供了路线图。重要的是,证明了我们的强化子选择法则可市场推广到其他遗传。总体而言,我们发现了举例来说七个针对不同神经纤维族裔和当中枢神经区域较强独特特异性的强化剂。即使采用了严格的标准(对目标年轻人的针对性> 90%),我们的法则仍较强许多现代的成功率(> 20%)。此外,正如高度开明的序列所得出结论的那样,作者测试的强化子集在之外全人类在内的所有群落当中被证明较强同等的针对性和理论上性。

Vormstein-Schneider, D., Lin, J.D., Pelkey, K.A. et al. Viral manipulation of functionally distinct interneurons in mice, non-human primates and humans. Nat Neurosci (2020).

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